长片段 PCR
作者：Admin 来源： 发布时间：21-03-17 17:00:38 浏览量：
长片段PCR通常是指扩增大于5kb的DNA片段。长片段PCR传统上使用 Taq DNA 聚合酶（用于快速延伸）和高保真酶（用于提高准确性）的混合物。随着具有高合成能力的高保真DNA聚合酶被发明出来，现在能够在更短的时间内实现更准确的长片段PCR。通过在DNA聚合酶中设计一个较强的DNA结合结构域，从而使其能够在短时间内扩增长片段（如，来自gDNA的 >20 kb 片段），实现高合成能力。此外，极高的保真度（如， Taq 聚合酶保真度的 >100倍）还有助于确保长片段扩增的低错误率。
表中在长片段PCR和克隆中使用高合成能力高保真DNA聚合酶的优势。
植绒拭子
DNA聚合酶的高合成能力可显著缩短长片段PCR的反应时间（在本例中，时间缩短了一半），而高保真度可减少筛选含正确插入片段克隆的工作量。
血糖试纸亲水性薄膜
当扩增>10 kb的目的片段时，应根据以下5个关键点对PCR方案进行优化：2. 如果DNA聚合酶的热稳定性较低，则需要使用更多量的酶，以弥补因延长循环时间导至的活性损失。4. 适当延长PCR步骤的持续时间，有助于模板DNA的完全解离及引物的结合。5. 适当延长PCR延伸时间，可确保目标区域的全长复制。
