免疫细胞化学

（immunocytochemistry，ICC）

ICC利用抗原抗体结合的反应原理，首先使用单克隆抗体与特异性的肿瘤标志物反应，然后通过酶底物反应显色来判断肿瘤细胞的存在。CTC的标志物主要分为三类（1）上皮细胞角蛋白（CK），最常用的CK蛋白是CK19；（2）上皮细胞膜特异性抗原，最常见的是EpCAM；（3）肿瘤相关糖蛋白（TAG）。通常CTC的ICC特异性标志是EpCAM+CK+DAPI+CD45-；而白细胞的标志是EpCAM-CK-DAPI+CD45+。通过ICC可以将CTC从大量的淋巴细胞悬液中分离出来。ICC的优点是能够分离出CTC并保持细胞形态；然而由于CTC的异质性，其细胞表面抗原不均一，导至ICC对CTC的检测并不敏感。

亲水性薄膜

流式细胞术

（flow cytometry，FCM）

FCM同样是利用抗原抗体结合的反应原理来筛选细胞的。流式细胞术可以将单克隆抗体制作称为荧光探针，通过荧光探针与CTC的特异性表面抗原来标记CTC。通常使用的荧光抗体是EpCAM和CD45。FCM的优点是可以在鉴定CTC的同时，检测细胞形态和进行DNA倍数分析。其缺点是需要大量的血液样本才能满足FCM检测的统计学要求，另外FCM检测CTC同样受制于CTC的表面特异性抗原的异质性。

试纸瓶

反转录聚合酶链式反应

（RT-PCR）

RT-PCR的原理是利用逆转录酶将肿瘤特异性mRNA序列逆转录为DNA，然后通过PCR反应扩增特异性的DNA片段，从而检测血液样本中是否存在CTC特异性的mRNA。通常情况下，在CTC的特异性mRNA的选择上主要有以下几种途径：（1）某些基因改变后RNA水平的异常表达，例如p53、ras的点突变，BRCA1、BRCA2的缺失突变，CD44产生异构体、某些基因异常扩增（ERBB2，EGFR）等；（2）组织特异性标志的mRNA如mucin，cytokeratin，ER，maspin；（3）肿瘤特异性标志mRNA，如CEA，β-HCG等。RT-PCR的检测CTC的优点是灵敏度高、重复性好、价格低廉；其缺点是mRNA的表达具有不稳定性、检测过程必须破坏CTC、假阳性率高。