RT-PCR技术灵敏且用途广泛，可应用于RNA的构造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表达解析等多种研究领域。虽然原理上PCR需要以DNA作为模板，RNA不能直接被扩增，但是经过反转录酶的作用把RNA反转录成cDNA后，PCR法便可应用于RNA的解析了，这就是今天我们要介绍的RT-PCR技术。

亲水膜

RT-PCR原理

RT-PCR是将RNA的反转录（RT）和以cDNA为模板的聚合酶链式反应（PCR）相结合的技术。整个反应过程分为两步，第一步是经反转录酶的作用，从RNA合成cDNA的过程；第二步是以cDNA为模板，在DNA聚合酶作用下扩增目的片段的过程。

吸湿铝箔

聚合酶链式反应（PCR）

PCR反应部分，则以酶的选择最为重要。根据扩增性能及下游应用对保真性要求的不同，主要分为普通PCR酶和高保真酶两种类型。根据客户的不同实验需求，Takara研发出了下表中的多种不同类型的RT-PCR试剂盒。普通PCR酶选择了扩增性能优越的Hot Start型DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS，大大提高了试剂盒的扩增性能和反应特异性。高保真酶则选择了两款畅销的PrimeSTAR系列高保真酶，满足不同模板的高效率扩增需求。